咨詢熱線
15000266580
15000266580
細胞傳代的一般方法
開始細胞傳代前，仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細胞（單層細胞，鏡檢適合）、培養液（MEM-0.2%LH培養液或MEM培養液或199等適合細胞有要求的培養液）、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。
用具：小方瓶（100m1）、克氏瓶、膠塞、吸管（10ml、1m1）、細胞吹打管（20 ml）（以上用具需經121℃至少15分鐘高壓滅菌）
C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱
操作步驟：鏡檢細胞，挑選生長狀態良好，細胞界限清晰，具有立體感，形態好無污染、無異常及可疑病變細胞。配制細胞培養液：按以下配比配制MEM-0.2%LH培養液100ml內，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。消化細胞；先用PBS洗液沖洗細胞表面1-2次，每次10m1，棄去洗液，向細胞瓶內加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細胞瓶平放，使消化液*覆蓋細胞表面。至細胞*脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細胞培養液吹打分散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶（100m1）中，再加入10m1細胞培養液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養量。加塞，置于37±1℃孵箱培養。約2～4天成片。（由細胞接種濃度決定）；填寫傳代記錄。
掃一掃 微信咨詢
